Phim 5 Nữ Điệp Vụ lấy bối cảnh tại London vào thế kỷ 19 - đây là một thành phố thuộc Vương Quốc Albion, hiện đang bị chia tách thành hai nửa Đông-Tây bằng một bức tường lớn. Câu chuyện theo chân 5 nữ gián điệp ngầm nhập học tại trường Queen's Mayfair danh giá. Dù còn đi học, các cô nàng đã lợi dụng tài năng siêu việt của mình để duy trì hoạt động của mình tại thế giới ngầm. Những cuộc tình báo, thâm nhập, cải trang, truy lùng của 5 cô gái xinh đẹp đã bắt đầu.